Реакция связывания комплемента (РСК). Цепная реакция урана и цепная реакция сенсаций

борде - жангу реакция

; 2) выражение реакции в присутствии гемолитической системы ().

Для постановки РСК изучаемые объекты (антитела и антигены) помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента; затем к анализируемой иммунной системе добавляют «индикатор» - гемолитическую систему. Если комплемент фиксировался иммунной системой, гемолиза не происходит (положительная РСК; рис., а); если же иммунная система не фиксировала комплемент и ее компоненты не соответствуют друг другу, гемолиз происходит (отрицательная РСК; рис., б). Ингредиенты реакции: 1) испытуемая , инактивированная прогревом в течение 30 мин. при t° 56°; 2) антиген (взвеси бактерий, экстракты органов и тканей, ); 3) комплемент (свежая сыворотка морской свинки); 4) гемолитическая система (сенсибилизированные барана, инкубированные с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°). Для разведения ингредиентов используют изотонический раствор хлорида натрия. Первый этап РСК продолжается 60 мин. при t° 37° или 18-20 час. при t° 4-6° (более чувствительная РСК), второй этап - 60 мин. при t° 37°.

Схема реакции связывания комплемента: а - положительная; б - отрицательная. 1 - комплемент; 2 - сыворотка больного; 3 - сыворотка здорового; 4 - антиген; 5 - гемолитическая сыворотка; 6 - эритроциты барана.

Борде - Жангу реакция - иммунологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген - антитело фиксировать свободный комплемент. РСК протекает в 2 фазы: 1) адсорбция антител на антигенах, 2) выражение реакции (бактериолиз или гемолиз), для которого необходимо присутствие комплемента. Зависимость бактериолитических реакций от присутствия комплемента позволяет выявить взаимодействие антител с антигенами в реакции Борде - Жангу. Показателем соответствия антител в этой реакции служит фиксирование комплемента соответствующими иммунными системами, выявляемое добавлением к реакционной смеси «индикаторной» гемолитической системы.

Реакция Борде - Жангу осуществляется в два этапа: сначала изучаемые антигены и антитела помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента, а после завершения адсорбции к анализируемой иммунной системе добавляется гемолитическая система (гемолизин + + эритроциты). При соответствии антигенов и антител происходит их взаимодействие и присутствующий в реагирующей смеси комплемент фиксируется иммунной системой. В этом случае при добавлении индикаторной системы гемолиза не происходит ввиду отсутствия комплемента (реакция положительная). Если анализируемые антитела не адсорбируются на антигенах, то комплемент в реагирующей смеси остается свободным и при добавлении гемолитической системы осуществляется гемолиз (реакция отрицательная).

Принцип разработанного Борде и Жангу метода серологического анализа лег в основу многочисленных модификаций реакции, используемой в диагностической практике и научно-исследовательской работе.

Обычная РСК, при которой регистрируется 100% лизис эритроцитов, предусматривает необходимость предварительного титрования комплемента; последний добавляется к иммунной системе в дозе, не превышающей необходимой для гемолитической реакции. Схемы постановки реакции определяются ее целью. В опыте могут испытываться различные дозы антигена при постоянном содержании сыворотки и комплемента, различные разведения сыворотки при постоянных дозах антигена и комплемента и т. д. Ингредиентами реакции являются: 1) испытуемая сыворотка, прогретая в течение 30 мин. при 56° с целью инактивации присутствующего в ней комплемента; 2) антигены (в качестве которых используют суспензии бактерий, экстрагированные из них белки, полисахариды и др.), экстракты из клеток растений и животных, вирусы и т. д., 3) комплемент - свежая сыворотка морских свинок, 4) гемолитическая система (сенсибилизированные бараньи эритроциты) - 5% суспензия эритроцитов, контактировавших с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°.

Для разведения ингредиентов используют физиологический раствор NaCl. Антикомплементарность отдельных ингредиентов испытывается в контрольных пробах. Первый этап реакции (адсорбция антител) осуществляется при t° 37° в течение 60 мин. либо при 4-6° в течение 18- 20 час. (РСК на холоде). В последнем случае происходит более полная фиксация комплемента, что увеличивает чувствительность метода. На втором этапе реакционные смеси выдерживают при t° 37°. Результат регистрируют в момент 100% гемолиза в контрольных пробах.

В диагностической практике используют активные, а также «непрямые» методы реакции связывания комплемента, являющиеся модификациями реакции Борде - Жангу. В первых из них показателем реакции служит изменение содержания комплемента в испытуемой сыворотке. Вторые основаны на том, что при некоторых заболеваниях сыворотки не содержат комплементсвязывающих антител, но способны предотвращать реакции с сыворотками, обладающими комплементсвязывающей активностью.

Наибольшая чувствительность и точность присуща количественной РСК, в которой регистрируют гемолиз в зоне частичного лизиса. Чувствительность данной модификации реакции Борде - Жангу обусловлена тем, что в средней зоне лизиса (20-80%) отношение количества комплемента к количеству лизируемых эритроцитов имеет линейный характер. В основе этой реакции лежит специальный метод титрования комплемента, количество которого выражается в 50% единицах (С H50) и подсчитывается на основе уравнения Крога, представляющего ход гемолиза в зоне частичного лизиса. Согласно уравнению, где x - количество взятого комплемента, y - степень гемолиза, выраженная как часть единицы, k - доза комплемента, дающая 50% лизис, а показатель 1/n выражает степень наклона гемолитической кривой.

Степень гемолиза устанавливается при помощи спектрофотометра или фотоэлектроколориметра.

Количественная РСК в свою очередь имеет ряд модификаций. В частности, микрометод обеспечивает большую точность определений при малом расходе ингредиентов.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 40,0 г порошка М175 или 36,0 г порошка М175А или 30,0 г порошка М214 в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45-50°С и асептично внести до 15-20% стерильную дефибринированную кровь (баранью, кроличью, человеческую или лошадиную). Тщательно перемешать, не допуская образования пузырьков воздуха в среде, и разлить среду в чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Этот агар впервые был предложен Борде и Жангу (1). Указанная пропись является модификацией Kendrick (2), которая рекомендована специалистами АРНА. Данные среды применяют для диагностики коклюша. На них при посеве отделяемого глотки, мазков из носоглотки или методом «кашлевых пластинок» можно выделить возбудитель коклюша - Bordetella pertussis .

Картофельный настой и пептический перевар животной ткани являются источником углерода и азота, глицерин и кровь - дополнительными источниками питательных веществ. Ввиду богатого состава эти среды позволяют получать обильный рост бордетелл, их можно использовать для приготовления биомассы бактерий в ходе приготовления коклюшной вакцины (3) или для сохранения лабораторных штаммов бордетелл (1). Обогащение среды 15% бараньей крови преследует цель обнаружения Bordetella pertussis по способности к гемолизу. Добавление 25% человеческой крови позволяет определить присутствие микобактерий в небольшом количестве мокроты, а также определить их чувствительность к стрептомицину (4).

Инкубирование засеянных сред рекомендуют проводить во влажной атмосфере (60%, в камере) при 37°С до 7 суток. Перед посевом среда не должна быть слишком сухой. Через 40 ч колонии Bordetella pertussis выглядят гладкими, выпуклыми, блестящими, с зоной гемолиза. Эти среды можно сделать селективными для бордетелл, если в их состав ввести антибиотик, например, пенициллин (5), метициллин (6) или, что особенно рекомендуется, цефалексин (7). Последний используют в концентрации 40 мкг/мл. В качестве противогрибкового средства в среду можно добавить амфотерицин В (10 мкг/мл).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному (М175, М214) или 1,6%-ному (М175А) агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. После добавления крови (15% об/об) среда должна иметь вишнево-красный цвет и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М175 (4,0% вес/об), М175А (3,6% вес/об) или М214 (3,0% вес/об) имеет рН 6,7 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 3-4 дня при 35°С.

БОРДɖЖАНГУ́ РЕАКЦИЯ , то же, что реакция связывания комплемента.

• - Борде́—Жангу́ реакция, то же, что реакция связывания комплемента...
• - то же, что реакция связывания комплемента...

  Ветеринарный энциклопедический словарь

• - см. Борде-Жангу среда...

  Большой медицинский словарь

• - Schiff reaction) - тест, позволяющий выявить наличие в тканях гликопротеинов, полисахаридов, некоторых мукополисахаридов, гликолипидов и ряда жирных кислот...

  Медицинские термины

• - БОРДЕ, ЖЮЛЬ ЖАН БАТИСТ ВЕНСАН, бельгийский бактериолог и иммунолог, удостоенный в 1919 Нобелевской премии по физиологии и медицине за работы в области иммунологии. Родился 13 июня 1870 в Суаньи...

  Энциклопедия Кольера

• - французская актриса...
• - професс. франц. слов. в высш. уч. зав.; р. 1772, † 27 авг. 1851...

  Большая биографическая энциклопедия

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - (J. J. Bordet, 1870-1961, бельг. бактериолог...

  Большой медицинский словарь

• - теория, согласно которой в основе образования комплекса антиген - антитело лежат явления адсорбции...

  Большой медицинский словарь

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - см. Реакция связывания комплемента...

  Большой медицинский словарь

• - плотная питательная среда для культивирования гемоглобинофильных бактерий, представляющая собой картофельно-глицериновый кровяной...

  Большой медицинский словарь

• - Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...
• - Бордё Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...

  Большая Советская энциклопедия

• - бельгийский иммунолог и бактериолог. Исследовал механизм серологических реакций; открыл реакцию связывания комплемента. Установил возбудителя и разработал метод иммунизации против коклюша. Нобелевская премия...

  Большой энциклопедический словарь

"Борде Жангу реакция" в книгах

Жюль Борде и Николай Чистович