На современном этапе удалось доказать, что гемолитическая болезнь плода и новорожденного является разновидностью аллоиммунной цитопении, обусловленной иммунизацией матери клетками крови плода, несущими на мембранах антигены, отсутствующие у беременной. Этот процесс может быть обусловлен разными антигенами, расположенными на мембране эритроцитов и других клеток крови (тромбоцитов, нейтрофилов) плода, которые попадают трансплацентарно в кровоток матери и вызывают образование у нее антител. Наиболее часто наблюдаются аллоиммунные эритропении, обусловленные несовместимостью крови плода и матери по антигенам системы АВО и Резус.

Характер развивающейся у плода анемии (гемолитический, апластический) зависит от антигена или антигенов, ее обусловливающих. При этом у плодов, имеющих эритропении различного генеза, наблюдаются сходные клинические проявления заболевания, доступные неинвазивным и инвазивным методам верификации.

Аллоиммунная эритропения, в том числе гемолитическая болезнь, плода/новорожденного (ГБПН) – заболевание, характеризующееся гемолизом эритроцитов и/или угнетением гемопоэза под влиянием антител, образующихся у матери к антигенам эритроцитов плода, взаимно проникающих через плацентарный барьер, проявляющееся у плода/новорожденного анемией, увеличением в крови бластных форм эритроцитов и, часто, билирубина.

Поскольку в патогенезе заболевания основное значение имеют различия крови матери и плода по антигенам эритроцитов, необходимо рассмотреть их иммуногематологические характеристики.

На современном этапе развития иммуногематологии известно более 250 антигенов эритроцитов, которые принято распределять в 29 генетически независимых систем. Каждая система кодируется одним или несколькими генами. Антигены эритроцитов являются протеинами (например, система Резус), гликопротеинами или гликолипидами (система АВО).

С 1980 года по сегодняшний день Международное общество переливания крови (ISBT) продолжает работать над классификацией известных медицинской науке эритроцитарных антигенов. Согласно используемой в настоящее время номенклатуре, все антигены эритроцитов делят на системы, коллекции и серии.

В таблице 1 представлен перечень известных 29 систем антигенов эритроцитов, объединенных в них по принципу наличия общих генов, кодирующих их продукцию. Системы антигенов принято обозначать в порядке их открытия трехзначными цифрами по возрастающей, начиная с 001. Внутри системы каждый антиген также имеет трехзначный номер. Таким образом, каждый антиген принято обозначать шестизначным номером.

Коллекции объединяют антигены, которые связаны биохимически и серологически на уровне фенотипа, однако не имеют общих генов, кодирующих их продукцию, а следовательно, не отвечают требованиям, предъявляемым к системам антигенов.

Антигены, у которых кодирующие их гены еще не изучены, объединены в серии из двух групп – с низкой и высокой частотой встречаемости.

Аллоантигены эритроцитов условно принято делить на часто встречающиеся антигены, антигены средней частоты встречаемости и редко встречающиеся антигены. Часто встречающиеся антигены обнаруживаются почти у всех людей, поэтому антитела к подобным антигенам образуются редко. Однако при необходимости произвести гемотрансфузию пациентам с наличием антител к часто встречающимся антигенам, как правило, возникают трудности с подбором доноров. В том случае, если антиген распространен с частотой менее 1 %, то его относят к группе редко встречающихся антигенов.

Таблица 1

Системы антигенов эритроцитов

У пациентов с изоиммунизацией к редким антигенам в большинстве случаев возникают трудности при проведении иммуногематологического обследования на верификацию антител, поскольку этот процесс требует длительного дорогостоящего исследования с использованием большого количества образцов и тест-систем.

Поскольку клинически значимые формы гемолитической болезни, в основном, обусловлены антителами, образованными к антигенам системы Резус, следует остановиться на классификациях, предложенных для антигенов этой системы. Таких классификаций существует несколько. Одной из них является классификация Резус антигенов Винера. Она основана на предположении, что в Rh-хромосоме имеется только одно место, которое может быть занято одним из восьми аллеломорфных генов. Каждый ген кодирует продукцию агглютиногена, представляющего собой комплекс антигенов. Обозначение антигенов по Винеру сложное, и в настоящее время оно в иммуногематологии широко не используется. Однако им принято обозначать специфичность антител в иммуноглобулине антирезус – «Rho (D)».

Экспертным комитетом по биологическим стандартам ВОЗ рекомендована к использованию классификация Резус антигенов Фишера-Рейса. Она основана на предположении о наличии в Rh-хромосоме трех мест для трех генов. При этом каждый генный комплекс состоит из трех антигенных детерминант: D или его отсутствие – d, С или с, Е или е в различных комбинациях.

В исследованиях последних лет было показано, что существуют всего два гена (RHD и RHCE ), отвечающих за продукцию антигенов эритроцитов системы Резус. Так, продукция антигена D контролируется геном RHD, в то время как антигенов С, с, Е, е – геном RHCE. При этом большое количество антигенов, составляющих систему Резус (48 антигенов), объясняется мутациями в этих двух генах. Отсутствуют данные о наличии антигена d, т. к. не имеется гена, отвечающего за синтез этого антигена.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденного может быть обусловлена и другими, кроме D, антигенами системы Резус, а также другими, так называемыми «иррегулярными», антигенами других систем или совокупностью нескольких антигенов одной системы. В этом случае для характеристики аллоиммунного процесса в литературе наиболее часто используют термин «эритроцитарная аллоиммунизация».

Именно аллоиммунизация по антигенам эритроцитов является основной причиной развития у плода анемического синдрома. Так, по данным Center for Disease Control and Prevention США (год), несмотря на внедренную программу иммунопрофилактики, резус-сенсибилизация встречается в 6,7 случаев на 1000 родившихся живыми. Если добавить к ним случаи развития аллоиммунизации под влиянием антигенов эритроцитов других групп (Келл, Кидд, Даффи), то ежегодно в США регистрируется более 30000 плодов, имеющих риск развития аллоиммунной анемии. К сожалению, подобная полномасштабная статистика по Российской Федерации пока отсутствует в связи с недостаточным внедрением подробного иммуногематологического тестирования пациенток групп риска.

Таким образом, для адекватной оценки наличия изоиммунизации, необходимо, прежде всего, провести поиск и идентификацию эритроцитарных антител, циркулирующих в крови беременной.

Роль антигенов эритроцитов в возникновении гемолитической болезни плода и новорожденного различна и определяется способностью аллоантител, образовавшихся к определенному классу антигенов, разрушать эритроциты или нарушать процессы их образования в организме плода. Процесс образования иммунных антител к антигенам эритроцитов плода зависит от наличия антигена, отсутствующего у матери, его иммуногенности, а также количества эритроцитов плода, попадающих в кровоток беременной.

Антитела к антигенам эритроцитов (аллоантитела) бывают естественные (регулярные) и иммунные (нерегулярные). Так, в сыворотке крови людей (кроме индивидуумов, имеющих группу крови АВ) постоянно присутствуют врожденные естественные антитела к антигенам А и/или В системы АВО, состоящей из четырех антигенов.

Заболевание у плода и, в последующем, у новорожденного, обусловлено несовместимостью эритроцитов матери и плода по системе антигенов АВО в 10–20 % всех случаев. При этом в 40 раз чаще гемолитическая болезнь плода/новорожденного развивается у женщин, имеющих группу крови 0 (I) и супруга с иной группой крови. Однако при возникновении подобного типа изоиммунизации тяжелые формы заболевания у плода и новорожденного наблюдаются только в единичных случаях – 1:3000 родов.

Антигены групп крови

1. Трансмембранные транспортеры (аг системы колтон – это аквапорин, т.е. транспортер воды; кидд – переносчик мочевины)

3. Рецепторы и молекулы клеточной адгезии

4. Ферменты (аг системы келл и др.)

5. Структурные белки (аг систем mns, гербих – гликофорины, содержащие большое количество сиаловых кислот, обеспечивающих отрицательный заряд эритроцитов)

Антигены эритроцитов:

1. гетерофильные антигены, встречающиеся у многих видов животных и бактерий;

2. неспецифические, или видовые антигены, не встречающиеся у других видов животных; но содержащиеся в эритроцитах всех людей;

3. специфические, или групповые антигены – изоантигены, содержащиеся на эритроцитах одних индивидуумов и отсутствующие у других. В трансфузиологии наибольшее значение имеют системы АВО и Rh.

Кровь каждого человека принадлежит к какой-либо одной из 4 групп системы АВ0 в зависимости от наличия на эритроцитах антигенов А и В и соответствующих им естественных антител-агглютининов анти-А и анти-В к отсутствующему антигену.

Различают: 0 (I); 0A, АА (II); 0B, ВВ (III); AB (IV)

Существует несколько видов антигенов А - А1, А2, А3, А4 и антигена В: В1, Вх, В3 и др. При этом интенсивность реакций с соответствующими анти-А или анти-В антителами прогрессивно снижается от каждого предыдущего к последующему. Так антиген А2 реагирует слабее, чем А1 и т.д. Среди лиц с группой крови А(II) частота выявления аг А1 составляет 80% наблюдений, для А2 – 15%, остальные варианты встречаются значительно реже. При этом примерно 1-8% лиц с группой крови А2(II) и 25-35% людей с группой А2В(IY) содержат в крови (избыточные) антитела А1, которые могут иметь естественное или иммунное происхождение. Иммунные антитела к антигенам эритроцитов могут образовываться при гемотрансфузиях. Это создает трудности при идентификации групп крови, выявляется в пробе на индивидуальную совместимость и требует подтверждения специальными моноклональными реагентами.

Людям, имеющим антитела против антигенов А и В нельзя переливать кровь лиц с соответствующими антигенами. Так, реципиентам с I группой крови нельзя переливать кровь людей других групп, кроме O (I). Групповые антигены отличаются высокой стабильностью. Они обнаруживаются в египетских мумиях, изготовленных до нашей эры.

Не менее важна в трансфузиологии система антигенов резус-фактора. Система резус Rh антиген был открыт Ландштейнером и Винером в 1940г. Главное отличие системы резус от системы АВО заключается в том, что кровь человека содержит только агглютиногены при полном отсутствии антител, подобных альфа- и бета-агглютининам системы АВО. Различают 5 основных аг этой системы: D(RhO), C(rh’), c(hr’), E(rh), e(hr). Эти антигены, находясь на эритроцитах в различных сочетаниях образуют 27 групп системы резус.

Антиген Rho(D) - основной в системе резус, он содержится в эритроцитах 85% людей, у остальных 15% он отсутствует. Это характерно для европейцев. У монголоидной расы он содержится у 95%. В норме Rh-антител в сыворотке нет, они возникают во время беременности или в результате переливания крови резус-положительной крови резус-отрицательному пациенту. Последствиями сенсибилизации по резус-фактору у беременной женщины является рождение детей с гемолитической болезнью или внутриутробная гибель плода. Если же пациенту, в крови которого содержатся такие антитела, переливается резус-положительная кровь возникает резус-конфликт с гемолизом переливаемых эритроцитов. Поэтому Rh (отр) пациентам можно переливать только Rh (отр) кровь. Кроме того, D-антиген имеет слабые варианты, которые объединяются в группу D(week) или D(u). Частота этих вариантов не превышает 1%. Доноры, имеющие эти антигены, должны рассматриваться как резус-положительные, поскольку переливание их крови резус-отрицательным пациентам может вести к сенсибилизации, а у сенсибилизированных вызывать тяжелые трансфузионные реакции. Но, реципиенты, у которых имеется антиген D(u) должны рассматриваться, как резус-отрицательные, и им можно переливать только резус-отрицательную кровь, т.к. нормальный D антиген может приводить к сенсибилизации пациента с развитием конфликта как у резус-отрицательных лиц.

Эритроцитарные антигены резус-системы Келл, Кидд, Даффи и др. сравнительно редко ведут к сенсибилизации и приобретают практическую значимость при многократных гемотрансфузиях и повторных беременностях

Между организмом Rh-отрицательной матери, не содержащей Д антигены и резус-положительного плода, содержащего этот антиген, приводящие к гемолитической болезни плода.

Если у Rh (отр.) женщины плод наследовал Rh (+) отца, его антигены могут поступать через плаценту в организм матери, где индуцируют синтез Rh-антител, которые проникают через плаценту плода и вызывают разрушение его эритроцитов - гемолитическая анемия плода.

При беременности Rh-антигены проникают в организм матери лишь в небольшом количестве и высоких титров специф. антител не образуют, поэтому при первой беременности у Rh(отр) матери конфликта не бывает. Исключение: инфекция, повышение проницаемости плаценты.

Т.к. Rh-антигены проникают в организм матери в основном при родах, то каждой последующей беременности количество антител нарастает - резус-конфликт.

Для предотвращения резус конфликта Rh(отр) женщинам перед родами вводят сыворотку, блокирующую Rh-антигены и отменяющих продукцию анти-резусных антител.

Rh- конфликт может возникнуть и при переливании крови, если Rh(отр) пациенту перелить Rh(+) кровь - синтез а/рез. антител и при повторных переливаниях - резус-конфликт.

Изучение антигенов эритроцитов и анализ иммуногенных свойств показали их различную способность к сенсибилизации в процессе трансфузий или при беременности. Расположив частоту встречаемости антител к антигенам эритроцитов в убывающем порядке, получили шкалу иммуногенности антигенов эритроцитов, которую также можно назвать шкалой приоритета трансфузионно опасных эритроцитарных антигенов. В настоящее время шкала с учетом только основных клинически значимых антигенов систем AB 0, Резус и Келл выглядит следующим образом: А, В > D > K > c > C > E > e .

СИСТЕМА AB0

Система АВ0 состоит из двух основных компонентов - антигенов А и В, пред ставленных на эритроцитах как по одному, так и вместе - группы А (II), B (III ), AB (IV ); отсутствие антигенов на мембране эритроцитов обозначают символом «0» - группа 0 (I ). Уникальное свойство системы AB 0 - наличие в норме антител к отсутствующим антигенам. Эти антитела называют изогемагглютининами анти-А, анти-В (или устаревшее обозначение α иβ ). Сочетание антигенов А и В на эритроцитах и антител к ним в сыворотке крови человека определяет его принадлежность к четырем основным группам крови (табл. 18-1).

Таблица 18-1. Основные группы крови человека системы AB0

Группа крови

по системе AB 0

Антигены системы AB0

Антитела системы AB0

A (II)

B (III)

AB (IV)

Антигены А и В представляют собой неоднородные структуры, определяющие наличие большого количества вариантов антигенов системы AB 0. Так, структуру антигена А описывают более чем 30 вариантами: А 1 , А 2 , А 3 , А 4??.. А 27 , А х, А end и др. На эритроцитах могут быть представлены только некоторые из перечисленных вариантов антигена; при этом возможна выработка антител к отсутствующим частям антигенной мозаики. Наиболее иммуногенна часть А 1 ; при ее обнаружении на эритроцитах человека говорят о второй А(II) или четвертой АВ(IV) группе крови. Диагностика подгруппы А 2 возможна только при использовании специаль ного реагента - анти-А 1 . В случаях наличия антигена А без выявления варианта А 1 - обобщенный вариант А 2 , обозначается подгруппой А 2 (II) или А 2 В(IV) соот ветственно. Выявляемые антитела к отсутствующим частям антигена А(А 1) называют экстрагглютининами и обозначают как анти-А 1 или α 1 .

Основные понятия

В эритроцитах человека имеются 5 основных антигенов системы резус (D, C, c, E, e), из которых наиболее иммуногенным является антиген D – Rh(D). Наличие или отсутствие этого антигена определяет резус-принадлежность крови: лица, имеющие D-антиген, принадлежат к группе резус-положительных (среди лиц белой расы их приблизительно 85%); лица, не имеющие его, относятся к резус-отрицательным (их, соответственно, около 15%).

Иммуногенность других (минорных) антигенов системы Rh значительно ниже и убывает в ряду: с>Е>С>е. Определение минорных антигенов системы резус, как правило, производится при необходимости многократных трансфузий, в тех случаях, когда в сыворотке реципиента обнаружены иммунные антитела к антигенам системы резус, в том числе при индивидуальном подборе крови.

Антиген D имеет слабые варианты, объединяемые в группу Dweek (Du), частота которой в популяции составляет около 1% . Эти эритроциты слабо или вообще не агглютинируются полными анти-Rh-антителами в реакции прямой агглютинации.

Доноры, содержащие Du, должны быть отнесены к резус-положительным, так как, во-первых, переливание их крови сенсибилизированным к D-антигену резус-отрицательным реципиентам может вызвать тяжелые трансфузионные реакции и, во-вторых, может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов. Поэтому кровь доноров должна обязательно тестироваться на присутствие Du и, в случае его обнаружения считаться резус-положительной.

Реципиенты, содержащие антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Поэтому кровь реципиентов не обязательно тестировать на присутствие Du.

Резус-принадлежность определяется в реакции агглютинации с помощью моноклональных реагентов или изоиммунных антирезусных сывороток, предназначенных для выявления Rh(D)-aнтигена в реакции прямой агглютинации (на плоскости и в пробирочном тесте; в солевой среде; в присутствии высокомолекулярных усилителей; с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами) или в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса). Метод определения зависит от класса антител в реагенте: если в нем присутствуют полные антитела (класса IgM), то реагент используется для определения резус-фактора методом прямой агглютинации в солевой среде; если в нем содержатся неполные антитела (класса Ig G), то он используется в реакции агглютинации в присутствии высокомолекулярных усилителей (альбумина, желатины и др.), с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами, в непрямом антиглобулиновом тесте.

Техника определения резус-принадлежности крови

Реакция агглютинации на плоскости с помощью анти-D моноклональных реагентов (полных антител)

Определение проводят в помещении с хорошим освещением. Наилучшие результаты тест дает при использовании высокой концентрации эритроцитов и температуре около +37° С, поэтому желательно использовать подогретую пластинку. Для исследования используют цельную кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке, консерванте или физиологическом растворе.

Процедура проводится в следующей последовательности:

1. Наносится большая капля (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

2. Рядом наносится маленькая капля (около 0,03 мл) исследуемой крови (эритроцитов).

3. Тщательно смешивается реагент с кровью чистой стеклянной палочкой.

4. Через 10–20 с пластинка мягко покачивается. Несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 с, результаты реакции следует учитывать через 3 мин после смешивания.

5. Результаты реакции записываются немедленно после окончания.

При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус-положительная, если агглютинация отсутствует – как резус-отрицательная. Если агглютинация намного слабее наблюдаемой с Rh (D)-положительными эритроцитами, исследуемая кровь принадлежит к подгруппе слабых антигенов Rh – Du. Для уточнения принадлежности такого образца крови к группе Du исследование проводят со вторым реагентом, содержащим IgG (неполные) анти-D антитела (см. гл. 6.2.2.3).

Реакция агглютинации с помощью неполных анти-D-антител (IgG) в присутствии высокомолекулярных добавок

Реакция проводится либо со специально приготовленным реагентом, уже содержащим усилитель (универсальный реагент с полиглюкином или альбумином для плоскости), либо усилитель добавляют в процессе проведения реакции (реакция конглютинации с желатином в пробирке).

Техника постановки реакции агглютинации на плоскости не отличается от описанной в гл.6.2.2.1. Однако универсальные реагенты могут давать ложноположительную реакцию с резус-отрицательными эритроцитами за счет содержащихся в них высокомолекулярных веществ, а также могут вызывать агглютинацию эритроцитов, покрытых антителами другой (не антирезус) специфичности. Поэтому необходимо проведение параллельных тестов с контрольным раствором используемого усилителя, но без анти-0-антител. Если контрольный раствор вызывает агглютинацию эритроцитов, то результаты тестирования не достоверны и следует повторить определение с другим реагентом, содержащим полные антитела IgM (лучше с моноклональными).

Реакции конглютинации с применением желатина. Для проведения этого теста могут быть использованы моноклональные реагенты и стандартные изоиммунные антирезус сыворотки с неполными антителами.

1. Вносят в пробирку 1 каплю (около 0,05 мл) исследуемой крови или взвеси эритроцитов (примерно 50%) в сыворотке.

2. Добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого до разжижения при +46...+48°С.

3. Добавляют 2 капли (0,1 мл) реагента анти-D и смешивают.

4. Помещают пробирку в водяную баню с температурой +46...+48°С на 5–10 мин или в суховоздушный термостат при той же температуре на 30 мин.

5. Доливают в пробирку 5–8 мл физиологического раствора и осторожно 1–2 раза переворачивают закрытую пробкой пробирку для перемешивания.

6. Определяют наличие агглютинатов, просматривая пробирку на свет невооруженным глазом или через лупу.

7. Немедленно записывают результаты определения.

Желатиновая проба требует обязательного проведения следующих контролей:

Со стандартными резус-положительными эритроцитами;

Со стандартными резус-отрицательными эритроцитами;

С исследуемыми эритроцитами и раствором желатина, но без анти-0-антител.

При положительном результате агглютинаты различимы в виде агрегатов разной величины на прозрачном фоне – кровь является резус-положительной. При отрицательном результате в пробирке агрегатов нет, а видна равномерно окрашенная непрозрачная взвесь эритроцитов – кровь является резус-отрицательной. Если наблюдается мелкозернистая, вызывающая сомнение агглютинация, то кровь необходимо тестировать в непрямом антиглобулиновом тесте (см. гл.6.2.2.3). Результаты желатиновой пробы являются достоверными только в случае, когда желатин сам не вызывает агглютинацию исследуемых эритроцитов, а результаты контролей со стандартными эритроцитами соответствуют ожидаемым. В случае неадекватных результатов контролей определение резус-принадлежности следует повторить с использованием другого реагента или образца желатина. Если желатин вызывает сам по себе агглютинацию исследуемых эритроцитов, то можно предполагать наличие на них антиэритроцитарных антител антирезус или иной специфичности (это наблюдается при гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной гемолитической анемии и некоторых инфекционных заболеваниях). В этом случае кровь должна быть направлена на исследование в специальную серологическую лабораторию.

Непрямой антиглобулиновый тест с помощью неполных анти-0-антител (IgG)

1. Приготовить 2–5% взвесь трижды отмытых в физиологическом растворе исследуемых эритроцитов. Для этого поместить в пробирку 5 капель (около 0,25 мл) исследуемой крови, трижды отмыть в 5–10 мл физиологического раствора; суспендировать осадок эритроцитов в 2–3 мл физиологического раствора или, предпочтительнее, в 2–3 мл раствора LISS, в котором фиксация антител на эритроцитах прочнее и происходит быстрее, чем в физиологическом растворе.

2. Внести 1 каплю анти-0-реагента в чистую маркированную пробирку.

3. Добавить 1 каплю 2–5% взвеси эритроцитов.

4. Инкубировать смесь при +37°С 30–45 мин (если эритроциты взвешены в физиологическом растворе) или 10–15 мин (если эритроциты взвешены в LISS).

5. Отмыть эритроциты 1 раз (в случае использования мо-ноклонального реагента) или 3 раза (в случае использования изоиммунной анти-0-сыворотки) большим объемом (5–10 мл) физиологического раствора. Однократная отмывка допустима только при использовании моноклональных реагентов. Полностью удалить физиологический раствор.

6. Добавить к осадку 1 каплю антиглобулинового реагента и тщательно смешать.

7. Центрифугировать 15–20 с при 2 000–3 000 об./мин.

8. Мягко ресуспендировать осадок и визуально определить наличие агглютинации.

9. Немедленно записать результаты определения.

При отсутствии агглютинации кровь является резус-отрицательной. При положительной реакции – резус-положительной; подгруппы Du могут вызывать слабую агглютинацию даже в этом высокочувствительном тесте. Прежде чем отнести донора Du к резус-положительным следует подтвердить заключение контрольным исследованием антиглобулиновой сыворотки со стандартными эритроцитами. Если контрольный тест положительный, интерпретация не является достоверной. В этом случае реципиент должен получать только резус-отрицательную кровь (эритроциты), а кровь такого донора не должна использоваться для трансфузий до окончательного выяснения его резус-принадлежности.

Агглютинация эритроцитов, обработанных протеолитическими ферментами, с помощью неполных анти-0-антител (IgG)

Неполные антитела способны вызывать прямую агглютинацию в солевой среде эритроцитов, обработанных бромелином, папаином, трипсином и другими протеазами. Этот метод высокочувствителен и надежен при выявлении слабых форм D-антигена. Он используется, главным образом, при автоматическом определении групп крови в системах "Gruppomatic”, в которых обеспечивается стандартность обработки эритроцитов ферментами и специально подбирается нужное разведение реагента, так как для этого теста характерен феномен прозоны (ингибирование агглютинации избытком антител).

При неавтоматизированном определении групп крови метод может быть использован в специализированных серологических лабораториях.

Пробы на совместимость переливаемой крови

Врач, переливающий кровь, обязан предупредить возможную несовместимость ее с кровью больного путем проведения контрольных исследований, включающих пробы на совместимость по группам крови АВ0 и по резус-фактору.

Пробы на совместимость производят непосредственно перед трансфузией. Для этого используют сыворотку крови больного и кровь донора из флакона, подготовленного для переливания.

«Групповые системы крови человека и
гемотрансфузионные осложнения», М.А.Умнова

Группы крови определяют с помощью реакции агглютинации при комнатной температуре на фарфоровой или другой белой пластинке со смачиваемой поверхностью. Для определения группы крови существует два способа: с применением стандартных сывороток, позволяющих установить, какие групповые агглютиногены (А или В) находятся в эритроцитах исследуемой крови; одновременно при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов (перекрестный способ). При этом…

В пробирку помещают 2 капли сыворотки больного, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина, специально приготовленного для лабораторных целей. Пробирку встряхивают для перемешивания содержимого, затем наклоняют почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое разлилось по ее стенкам, и в течение 5 мин медленно поворачивают вокруг вертикальной оси, осуществляя контакт смеси сыворотки больного…

Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10 — 30 с от начала перемешивания в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие агглютинаты постепенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка совсем…

Кровь донора необходимо дважды отмыть в пробирке 8 — 10-кратным объемом изотонического раствора хлорида натрия путем центрифугирования, после чего удалить надетой и пользоваться для исследования осадком отмытых эритроцитов. Одну маленькую (0,01 мл) каплю отмытых эритроцитов переносят в другую пробирку, добавляют в нее 3 капли сыворотки больного, перемешивают ее с эритроцитами донора и помещают пробирку в…

I. Под предварительно сделанными обозначениями на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток групп 0αβ(I), Aβ(II) и Bα(III). Поскольку используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по 3 капли в следующем порядке слева направо: 0αβ(I), Aβ(II) и Bα(III). II. На нижнюю часть пластинки…

Трактовка результатов производится путем оценки и сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток (два верхних ряда) и при помощи стандартных эритроцитов (нижний ряд).  Результаты реакций, полученные при помощи стандартных сывороток II стандартных эритроцитов, должны совпадать, т. е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной н той же группе крови. Эти результаты могут быть выражены…

Для определения резус-принадлежности, т. е. выявления в крови людей наличия или отсутствия антигенов системы резус используют стандартные сыворотки (реагенты) анти-резус, различные по специфичности, т. е. содержащие антитела по отношению к различным антигенам этой системы. Для определения антигена Rh0(D) чаще всего применяют сыворотку антирезус с добавлением 10% раствора желатина или используют стандартный реагент анти-резус, приготовленный заранее…

I. В 2 пробирки вводят по одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов и по 2 капли 10% раствора желатина, подогретого до разжижения в теплой воде (46 — 48 °С). II. В одну из этих пробирок к смеси эритроцитов и желатина добавляют 2 капли сыворотки анти-резус. В другую пробирку эту сыворотку не добавляют, она служит контролем…

Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу с двукратным увеличением. Результат трактуют в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации эритроцитов. При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных зерен или хлопьев на прозрачном, почти обесцвеченном фоне жидкости. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость. Образцы…

I. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой крови или эритроцитов (можно не отмывать от консерванта), добавляют 1 — 2 капли стандартного универсального реагента анти-резус и перемешивают эритроциты с реагентом путем встряхивания пробирки. II. Пробирку наклоняют почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стенкам, а затем медленно поворачивают в таком положении…